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魚(yú)腫瘤壞死因子a(TNF-a)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
BS-3794魚(yú)腫瘤壞死因子a(TNF-a)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)魚(yú)血清、血漿或組織勻漿中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。實(shí)驗(yàn)通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：
將純化的魚(yú)TNF-α抗體包被于微孔板形成固相抗體
加入樣本后，樣本中的TNF-α與固相抗體結(jié)合
加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物
經(jīng)洗滌后加入底物TMB顯色
顯色深淺與樣本中TNF-α濃度呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度計(jì)算含量
二、試劑盒組成
96孔/48孔酶標(biāo)板(預(yù)包被抗體)
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉，需復(fù)溶)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
樣本稀釋液
HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體
顯色底物A液(TMB)
顯色底物B液
終止液
濃縮洗滌液(20-30倍濃縮)
封板膜
說(shuō)明書(shū)
三、自備器材
酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng))
精密移液器及槍頭(0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL)
37℃恒溫箱
洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板裝置)
去離子水
離心機(jī)(2000-3000rpm)
四、樣本處理
血清樣本
室溫血液自然凝固10-20分鐘
2000-3000rpm離心20分鐘
立即分離血清，避免溶血
分裝保存：-20℃(避免反復(fù)凍融)
血漿樣本
使用EDTA/肝素抗凝
3000rpm離心30分鐘
立即分離血漿
分裝保存：-20℃(避免反復(fù)凍融)
組織勻漿
組織塊加入生理鹽水搗碎
3000rpm離心10分鐘
取上清液檢測(cè)
五、操作步驟
試劑準(zhǔn)備?：
標(biāo)準(zhǔn)品：凍干粉加1mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，靜置10分鐘后混勻，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行倍比稀釋
洗滌液：濃縮液用去離子水稀釋(20-30倍)，室溫使用
加樣?：
設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔
每孔加100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本
37℃孵育90分鐘
洗板?：
甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液
靜置1分鐘后甩去，重復(fù)5次
吸水紙上拍干
加酶標(biāo)抗體?：
每孔加100μL HRP標(biāo)記抗體(空白孔除外)
37℃孵育60分鐘
顯色?：
每孔加底物A、B各50μL
37℃避光孵育15分鐘
終止反應(yīng)?：
每孔加終止液50μL
15分鐘內(nèi)測(cè)定OD值
六、注意事項(xiàng)
試劑保存?：
2-8℃保存，有效期6個(gè)月
使用前室溫平衡20分鐘
濃縮洗滌液結(jié)晶時(shí)，37℃水浴溶解
操作規(guī)范?：
不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品/樣本使用新槍頭
加樣順序保持一致保證孵育時(shí)間相同
顯色底物避光保存，變藍(lán)即失效
終止液加入順序與底物一致
質(zhì)量控制?：
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)R值應(yīng)≥0.95
批內(nèi)CV<10%，批間CV<15%
靈敏度通常<1.0ng/mL
七、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
樣本OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算濃度
樣本稀釋倍數(shù)需在最終結(jié)果中乘以相應(yīng)系數(shù)
八、性能指標(biāo)
檢測(cè)范圍：3-80ng/mL(具體以實(shí)際試劑盒為準(zhǔn))
特異性：不與其他細(xì)胞因子交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)/板間變異系數(shù)符合要求
九、安全提示
終止液含硫酸，操作時(shí)注意防護(hù)
所有廢棄物按生物危害物處理
實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免交叉污染
注：以上僅供參考，本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。
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